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본 연구에 사용한 점박이응애는 총 22개 계통으로, SL_YS 계통은 2012년 11월 서울의 잡초에서 채집하여 감수성 계통으로 사용하였고, 나머지 21개 계통은 2021년부터 2024년까지 딸기 재배지에서 채집하여 외부 해충이나 약제의 노출 없이 누대 사육하였다(Table 1). 아크릴케이지(400 × 400 × 500 mm)에서 파종 후 15−20일이 지난 강낭콩을 기주로 공급하여 온도 25 ± 2^oC, 상대습도 60 ± 20%의 조건으로 누대 사육하였다. 생물검정에 사용한 점박이응애는 누대 사육한 암컷 성충의 나이를 맞추어 사용하였다. 나이를 맞춘 암컷 성충을 확보하기 위하여, breeding dish (Ø 100 mm, SPL Life Science)에 탈지면(210 × 150 mm, 동아위생재료)과 필터페이퍼(Ø 90 mm, Whatman), 그리고 물 80 mL를 넣은 후 강낭콩 엽절편(Ø 90 mm)의 뒷면이 위를 향하도록 하여 50마리의 암컷 점박이응애를 접종하였다. 접종한 성충은 28^oC 조건에서 24시간동안 산란을 받은 후 모두 제거하였다. 알에서 부화한 약충 단계에서 7일이 지나면 강낭콩 포트 2개를 넣은 곤충 사육망(360 × 360 × 610 mm)으로 약충이 있는 엽절편을 옮겨 발육시켰고, 산란 후 10일차에 도달한 점박이응애 암컷 성충을 실험에 사용하였다.

약효 평가는 acynonapyr 액상수화제(유효성분함량 20%) 제품을 추천농도인 100 ppm로 희석하여 다배열생물검정방법을 기반으로 수행하였다(Kwon et al., 2022). 플라스틱 트레이(440 × 150 × 400 mm, 청운)에 탈지면(410 × 150 mm, 동아위생재료)을 올려 물 200 mL로 적신 후 필터페이퍼(195 × 145 mm, 아리랑과학) 2매를 나란히 올려 준비하였다. 그리고 강낭콩 엽절편(Ø 30 mm)을 희석한 약제에 10초간 침지 후 후드 안에서 30분간 음건하였다. 준비한 트레이에 엽절편을 8×3의 배열로 치상한 후, 점박이응애 암컷 성충을 흡충기로 포집하여 계통 별 15마리씩 3반복으로 접종하였다. 사충판별 기준은 세필붓(0.8 mm, 5/0호, BABARA)으로 자극하였을 때 충체 길이만큼 이동하지 못하면 죽은 개체로 간주하여 3일동안 24시간 간격으로 사충수를 관찰하였다.

21개 야외 계통에 대한 acynonapyr의 약효 평가에는 가중평균사충율을 적용하였다(Kwon et al., 2022). 24시간 간격으로 3일간 사충율을 산출하여 일자 별 사충율의 차이값을 가중치(wᵢ)로 하고 해당 일자의 사충율(xᵢ)과 곱하였다. 이후 곱한 값의 합계를 가중치의 합계로 나누어 3일 동안의 사충속도가 반영된 가중평균사충율(x¯)을 산출하였다.

x¯ = (Σ (wᵢ · xᵢ)) / (Σ wᵢ)

− xᵢ: 해당 시간 사충율
− wᵢ: 각 시간대 별 사충율 값의 차이

점박이응애 야외 개체군의 acynonapyr 약제에 대한 저항성 발달 수준을 평가하기 위하여, SL_YS 계통과 약효가 가장 낮았던 24TU030 계통을 대상으로 실험을 진행하였다. 생물검정방법은 상기 약효 평가와 동일한 다배열생물검정방법으로, SL_YS와 24TU030 계통 각각 3.125-50 ppm, 625−10,000 ppm의 5개 농도 구간을 2배 간격으로 연속 희석하여 15마리씩 3반복으로 처리하였다. 농도 별 24시간차 평균 사충율을 Abbott (1925)의 공식에 따라 무처리구 사충율을 이용하여 보정한 뒤, 이를 SPSS 13.0 (IBM, 미국)의 프로빗 분석(Finney, 1971)을 통하여 반수치사농도(LC₅₀)를 산출하였다. 저항성비는 24TU030 계통의 LC₅₀을 SL_YS의 LC₅₀으로 나누었으며, 두 계통의 방제효과지수(control efficacy index, CEI)는 계통 별 LC₉₀을 제조사 추천농도(100 ppm)로 나누어 계산하였다(Kang et al., 2023; Lee et al., 2023; Kim et al., 2024).

본 연구의 통계분석은 R software를 활용하였다(R core team, 2025). 야외 채집 계통 간 약효 비교에 일원분산분석을 진행하였고, 사후 검정은 R 내 multcomp 패키지의 glht 함수를 이용하여 Tukey’s HSD test를 실시하였다. 유의성 차이의 표시는 cld 함수를 이용하여 알파벳 소문자로 표시하였다.

2021년부터 2024년까지 딸기 재배지에서 채집한 21개 개체군에 대한 acynonapyr에 대한 약효를 평가하였다(Fig. 1−3). 무처리구 사충율은 24시간 간격으로 3일동안 평균 1.7%, 5.6%, 7.3%로 변동되었다. 약제 처리구에 대한 21개 계통의 평균 사충율은 24시간 간격으로 72시간동안 27.2%, 46.5%, 그리고 60.6%로 시간이 경과함에 따라 유의하게 증가하였다(F_3,186= 16.503, P < 0.001)(Fig. 1). 각 계통의 시간 별 결과를 가중평균사충율로 전환하였을 때는 19.6−100%로 유의한 차이를 보였다(F_20,42= 14.676, P < 0.001)(Fig. 2). 가중평균 사충율 값을 기준으로 년도별로 살펴보면(Fig. 3), 2021년 6개 계통 사충율 범위가 36−100%로서 평균 62.4% 를 보였다. 2022년 4개 계통의 경우 38.5−92.3%로서 2021년 보다 약간 높은 75.9%의 사충율을 보였다. 그러나 2023년 4개 계통 의 경우는 40%(30.7−62.3%)로서 감소하기 시작하였으며, 2024년 7개 계통의 가중평균사충율 평균값은 34.4%(19.6−45.2%)로서 통계적으로 유의한 약효 감소 현상이 나타났다(F_3,59 = 15.286, P < 0.001)(Fig. 3). 특히, 2024년 계통 중 24TU030은 19.6%로 야외 개체군에서 약효 감소 현상이 나타난 것으로 확인되었다.

Fig. 1.  
Mortality from 24 to 72 hours of yearly collected Tetranychus urticae strains against acynonapyr. Error bars indicate the standard deviations. Small alphabetical character means the statistical difference by Tukey’s HSD.

Fig. 2.  
Acaricidal efficacy based on the weighted mean mortality against acynonapyr of yearly collected Tetranychus urticae strains. Error bars indicate the standard deviations. Small alphabetical character means the statistical difference by Tukey’s HSD.

Fig. 3.  
Average weighted mean mortality against acynonapyr of each collected year. Error bars indicate the standard deviations. Small alphabetical character means the statistical difference by Tukey’s HSD.

연도별 약효 평가에서 가장 낮은 사충율을 나타낸 24TU030 계통을 대상으로, acynonapyr에 대한 반수치사농도 기준 저항성비와 제품의 추천농도 기준 방제효과지수를 각각 산출하였다(Table 2). 그 결과, 저항성비는 약 166배를 보였으며, 방제효과지수는 약 122배로서 해당 계통은 acynonapyr에 대해 저항성을 나타냈을 뿐만 아니라 약효 감소 현상도 지니고 있는 것으로 확인되었다.